Corante EvaGreen® para detecção de COVID-19 pelo método “LAMP” de 1 estágio para casas, clínicas e pontos de entrada (por Biotium)
A nova epidemia de coronavírus de 2019 (COVID-19) é uma crescente emergência de saúde pública de interesse internacional. Em 25 de fevereiro de 2020, o vírus se espalhou para mais de 33 países, adoeceu mais de 80.000 pessoas em todo o mundo e matou mais de 2.600 pessoas. Os métodos atuais para detecção qualitativa de COVID-19 dependem principalmente da transcrição reversa-PCR (RT-PCR). No entanto, os testes de RT-PCR podem produzir resultados falsos negativos devido à sensibilidade de detecção insuficiente para pacientes com baixa carga viral. Além disso, o RT-PCR requer laboratórios bem equipados e pessoal qualificado. Devido à rápida disseminação do vírus e à capacidade limitada dos hospitais, é urgentemente necessário um diagnóstico molecular mais preciso, rápido e fácil de usar para o COVID-19.
Em um recente manuscrito pré-impresso publicado no ChemRxiv ™, El-Tholoth e colegas da Universidade da Pensilvânia desenvolveram ensaios simples de assistência médica para detecção qualitativa de COVID-19 usando LAMP de um estágio (amplificação isotérmica mediada por loop) ou dois Penn-RAMP de estágio (amplificação da polimerase recombinase mais LAMP). A especificidade foi alcançada amplificando uma sequência conservada de ORF1ab do genoma COVID-19 com alta homologia para o vírus e alta divergência de todos os outros coronavírus. O ensaio LAMP de um estágio contém uma mistura principal isotérmica com o corante EvaGreen® para uma amplificação confiável e robusta. Os resultados mostram que o ensaio LAMP de um estágio tem um desempenho comparável aos métodos RT-PCR para detecção de COVID-19 em testes com modelo purificado e amostras simuladas de pacientes. Os resultados do ensaio Penn-RAMP de dois estágios mostraram sensibilidade de detecção 100 vezes maior que os métodos LAMP ou RT-PCR de um estágio em amostras simuladas semelhantes. Além disso, o ensaio Penn-RAMP pode ser realizado inteiramente em tubo fechado e é adequado para detecção colorimétrica por LCV (violeta de cristal leuco). Dada a simplicidade, a alta sensibilidade e a instrumentação mínima exigida pelo Penn-RAMP, os autores propõem uma validação adicional para seu uso como diagnóstico COVID-19 no ponto de atendimento.
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Referências:
Coronavirus Map: Tracking the Spread of the Outbreak – The New York Times. Available at: https://www.nytimes.com/interactive/2020/world/asia/china-wuhan-coronavirus-maps.html. (Accessed: 25th February 2020)
El-Tholoth, Mohamed; Bau, Haim H.; Song, Jinzhao (2020): A Single and Two-Stage, Closed-Tube, Molecular Test for the 2019 Novel Coronavirus (COVID-19) at Home, Clinic, and Points of Entry. ChemRxiv. Preprint. https://doi.org/10.26434/chemrxiv.11860137.v1